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Twist、E-cadherin和N-cadherin在胃癌的表达及其意义

目的研究胃癌中转录因子Twist,上皮性钙黏附素(E-cadherin)以及神经性钙黏附素(N-cad-herin)的表达及三者与胃癌侵袭转移的关系。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测58例胃癌组织和对应癌旁组织中Twist、E-cadherin以及N-cadherin mRNA的表达水平,将结果与临床资料进行统计分析。结果Twist、E-cadherin、N-cadherin mRNA在胃癌组织中表达分别为1.55±0.51、0.86±

3 4 4

广东医学

21 0 0年 2月第 3卷第 3期 Gu n d n l a g o gMe ia J u nl Fb 2 1,V 1 3, o dcl o r a e . 0 0 o. 1 N .3

T i、 ws E—cd ei t ahr n和 N—cd ei胃癌的 ahr n在表达及其意义 洪士开,陆云飞,陈俊强,韦录 广西医科大学第一附属医院胃肠外科 (宁 5 02 )南 3 0 1

【摘要】目的

研究胃癌中转录因子 T i,上皮性钙黏附素 ( ws t E—cd ei) ahr以及神经性钙黏附素( n N—cd a—

hr )表达及三者与胃癌侵袭转移的关系。方法采用逆转录一聚合酶链反应 ( T—P R)法检测 5 en的 i R C方 8例胃癌

组织和对应癌旁组织中 T i、 ws E—cd ei t ahr n以及 N— ahr R A的表达水平,结果与临床资料进行统计分析。 cd e nm N i将 结果 T i、 edei、 ws E— ahr N—cd e nmR A在胃癌组织中表达分别为 15 0 5、.6± . 1 15 0 5; t n ahr N i .5± . l0 8 0 2、. 3± .4在癌旁组织中分别为 12 03、.7±02、. 5± .7胃癌组织中 3种 m N与癌旁组织中相比,异均有统 .2± . 9 10 . 0 I1 0 3; R A差计学意义 ( 0 0 ) T i、—cdei、—cdei达与胃癌浸润深度、巴结转移、处转移有关 (< P< . 1。 ws E ahr N ahr t n n表淋远 P 0 0 ) ws与 N—cd e n表达成正相关 ( .5。T i t ahr i r=0 35 . 6,P< . 5, ws与 E—cd e n表达成负相关 (=一 00 )T i t ahr i r 04 6 P< . ) .4, 0叭。E— ahr cd e n与 N— ahr i cd e n表达成负相关 (=一03 9 P< 0 0 ) i r .5, .5。结论 cdei及 E— ahr ahr n cdei n的表达可能对预测胃癌的转移、断预后具有一定价值。判 T i及 N—cd ws t a-

hr en在胃癌中高表达而 E—cdel i ahr n低表达可能与胃癌发生、发展以及浸润转移有密切关系,联合检测 T i、 ws N— t

【关键词】胃癌; ws; T i上皮钙黏附素;神经钙黏附素;肿瘤转移 t

胃癌

是我国常见的恶性肿瘤之一,床上肿瘤转临移是导致其治疗失败的主要原因。上皮一问质转化 ( pteil—m sn h m lt nio E ei l h a ee c y a r s n, MT)癌细胞脱 a t i和

13 R . T—P R检测用 RN pe ueTsu i试剂 C A rpp r i eKt s

盒提取总 R A N。经紫外微量分光光度仪定量后, 2取

g总 R A, N随机引物法逆转录合成 c N。以p—at D A en i 作为内对照,行半定量聚合酶链反应 ( C )增。进 PR扩 T i引物长度为 2 0 b。L:一GG G C G A T T. ws t 1 p 5 A T C C G C- TACGAG一 3 R: 一 T GGAGGACCT: 5 CT GGT AGAGG一

离原发灶是完成转移的关键步骤。最近有研究发现, 在某些上皮癌中有神经性钙黏素 (—cd e n的反 N ahr ) i常表达,在增强癌细胞的侵袭和转移方面较上皮性且 钙黏素 ( E—cd ei )表达更为明显,能存在 E— ahr低 n可

3。E—e d ei ahr n引物长度为 1 2 b 3 p,L:5一T— GC C CAGAAAATGAAAAAGG一 3 R:5一 GT . GTATG TG-

cd e n向 N—cd e n的转化…。 T i是新近发现 ahr i ahr i ws t

的凋亡抑制蛋白,研究证实 T i参与了某些上皮来源 ws t 的肿瘤细胞发生上皮一问叶变并促进其侵袭转移。, 同时 T s基因在肿瘤进展中能独立诱导一系列问充 wi t

G A T C T C一 N— ahr C A G G F 3。 edei物长度为 16b, n引 5 p L: 一 CCGGAGAAC 5 AGT CTC CAACT一 3 C,R: 5一

C C C A G G A C G C一3。内参照 8一at I CAA AA CG AT cn弓 i 物长度为 2 2b, 5 p L:5一C AC C 1r T T Ar GG A C AC Tc C C r 一

质标记物产生。为了阐明胃癌是否通过 E T导致 M

其高度侵袭的恶性生物学行为,我们通过检测 T i、 ws E t ~

3, 5 R:一A AA T T A GC A A一 3。反 A AG A r AG G AG T

ed e n

N—cdei因在胃癌中的表达,胃 ahr及 i ahr n基为

应条件:5C变性 5r n 9 c变性 4;ws、— 9q预 i;5I a C 5ST i E t ed e n N— ah I 引物分别在 6.℃、6 2、 ahr、 cde n i i 3种 34 6.℃ 5 .℃退火 4;2延伸 1 i,0个循环; 2终末 69 5S7℃ n3 a r 7℃延伸 1 i。设 3对照:别用双蒸水替代 R A样 0m n种分 N品进行扩增;不加逆转录酶进行扩增;阳性样品替代用 R A样品进行扩增。取扩增产物 5 L在溴化乙锭染 N ,色、.%琼脂糖凝胶下 10 V电泳 4 i, K dk 15 0 5m n以 0a

癌转移的预测和预后评估提供有价值的资料。 1资料与方法 11一般资料 . 收集 20年 8月至 20 07 08年 3月我院

胃肠腺体外科手术切除的病理确诊为胃癌的标本 5 8

例。男 3 7例, 2例,女 1年龄(55 1 ) 5 .±l.岁。取癌及癌 2旁组织 (肿瘤切缘 5e1。所取组织迅速冻存于液氮并 n)

保存在一 0 8℃冰箱中,以便提取 m N R A。以上所有标本均经临床和病理诊断证实,具有完整的病例资料。 12试剂和仪器 . R A r ue iu i试剂盒购自 N p ppr Ts e t e s K Tagn公司,转录反应试剂盒购白 Fml t公司, i e n逆 e ea ns D A胶回收试剂盒购自 O ea司。p 1一Ts pe N mg公 MD 9 m l i

D A A a s . N nl i2 0凝胶图像分析系统处理, ys读取目的条带和内参的光密度值,果以比值 (结样本光吸收度 A 值/内参照光吸收度 A值 )表示。 14目的基因克隆、 .筛选、序比对测用 D A胶回收 N试剂盒纯化电泳后的 P R扩增产物,纯化的目的产 C将

Vc r et购于 TK R公司。E o . H为本室保存。 o aaa el D 5 i

物片段与 p 1 MD 9一T s peV c r i l et连接, m o制备感受态菌,转化 D 5z H o感受态菌,、蓝白斑筛选阳性克隆,接种 L B培养基,随机挑取 3菌落,个摇菌过夜,进行 P R鉴 C

△通信作者

定。选取经过 P R初步鉴定的阳性菌落,上海生工

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