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动物狂犬病病毒巢式RT_PCR检测方法的建立

 中国兽医学报 2009年8月 第29卷 第8期 ChinJVetSci Aug.2009 Vol.29 No.8

动物狂犬病病毒巢式RT_PCR检测方法的建立

 1003

动物狂犬病病毒巢式RT2PCR检测方法的建立

江 禹1,王莉莉2,韩小虎3,邵明富1,范金红2,刘 芳1,涂长春13 (1.军事医学科学院军事兽医研究所,

吉林长春130062;2.吉林农业大学,吉林长春130118;31吉林大学畜牧兽医学院,吉林长春130062)摘要:以GenBank收录的多基因型狂犬病病毒(RV)N基因序列为参考,设计了简并的PCR引物,建立了能够有效扩增7种基因型RV基因组片段的巢式RT2PCR(nestedRT2PCR)方法,命名为RVN371。4.6个TCID50的SRV9固定毒,对犬、猪、位置正确,未见非特异性扩增条带。对比试验表明,RVN371验(MIT)高出100倍;在对3种鼠脑固定毒、12,RV—验(FAT)完全符合。RVN371。关键词:狂犬病病毒;检测;巢式RT2PCR

中图分类号:S852.655   :A(2009)0821003205

2fordetectionanimalrabiesvirus

JIANG,GLi2li2,HANXiao2hu3,SHAOMing2fu1,FANJin2hong2,LIU

Fang1,

TUChang2chun13 (1.TheMilitaryVeterinaryInstitute,AcademyofMilitaryMedicalSciences,

Changchun130062,China;2.JilinAgriculturalUniversity,Changchun130118,China;3.CollegeofVeterinaryandAnimalSciences,JilinUniversity,Changchun130062,China)

  Abstract:AnestedRT2PCRnamedRVN371fordetectionofLyssavirusRNAisdescribed.Theaimsequence

amplifiedinthemethodislocatedintheRABVNgeneandfourdegeneracyprimersweredesignedforspecialPCR,thefirstroundproductionis845bpandthesecondroundis371bp.Theresultsofsensitivitytestshowed4.6TCID50cellculturedSRV9straincouldbedetectedandthemethod’ssensitivityis100timesmorethansucklingmouseinoculationtestwhichinfectedwithstreetstrains.Allthe7genotypesLyssaviruscanbeamplifiedspecially.Thereareclearlybandsduringuseddifferentialspeciestissues,suchascanine,swine,bat,andcattle.IthasbeenprovedthepartofrabiesvirusgenomeweregottenaftersequencedPCRproductionswhichthetemplatesis12streetstrains.Theresultsindicatedtheprotocolcanbeusedforanimalrabiesdiagnosisinlaboratoryandcontributedtopathogensurveillanceofrabies.

  Keywords:rabiesvirus;detection;nestedRT2PCR3Correspondingauthor,Changchun2tu@http://doc.xuehai.net

  狂犬病是重要的人兽共患自然疫源性传染病,死亡率几乎为100%。我国是狂犬病的高发地区,人的狂犬病病死数位居世界第二,仅次于印度。2002年以来年度死亡人数均超过2000人,突显出狂犬病对公共卫生安全的威胁[1]。

我国狂犬病病毒野外分离株仅限于基因Ⅰ型(Rabiesvirus,RABV),它所引发的狂犬病遍布世

界,RABV是弹状病科(Rhabdoviridae)狂犬病毒属(Lyssavirus,LV)的成员,为不分节段的单股负链RNA病毒,基因组长度为11928~11932nt,编码5种结构蛋白,顺次为核蛋白(N)、磷酸蛋白(M1)、

基质蛋白(M2)、糖蛋白(G)和RNA聚合酶(L),分别由对应的5种结构基因编码,其中N基因具有毒株间相对保守和高拷贝复制的特点,成为病毒分型、系统发生分析和分子诊断的目标序列[2]。已发现的LV除4种未分型外,其他分属7个基因型,在欧洲大陆已发现了IRKV、WCBV和基因Ⅴ、Ⅵ型LV分布[3]。考虑到欧亚大陆的连续性和国际贸易的频繁往来,无法排除在中国会有其他基因型LV出现的可能。

  收稿日期:2008210227

  基金项目:国家“863”计化资助项目(2006AA02Z456);国家自

然科学基金资助项目(30600445)

  作者简介:江 禹(19722),男,助理研究员,博士。

3通讯作者,E2mail:Changchun2tu@http://doc.xuehai.net

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