PCR的延伸时间(网上资料总结)
关于PCR反应的延伸时间(网上资料总结)
①网友:在分子生物学书上看到:延伸时间与产物片段长度有关,产物在1kb以内的延伸时间为1分钟左右,3kb-4kb的需延伸3-4分钟
②引物长度一般在15~30碱基之间。引物长度(primer length)常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA 聚合酶进行反应。 ③3400bp的基因PCR时怎样设定程序,尤其是延伸的时间?求指教
这么长的PCR产物需要用特殊的Taq酶(如TAKARA的LA Taq,不知道这个酶是否换生产),普通的Taq酶一般延伸不到这么长。你需要根据Taq酶的延伸速度计算延伸时间(Taq酶的延伸速度一般是几百bp/min,你可以查查你用的Taq酶的延伸速度),延伸时间=产物长度/延伸速度,然后留一些冗余。3400bp至少需要延伸4-5min左右。
你要先看你所用的酶的说明书,上面有该酶的热启动温度,变性温度,延伸温度等等,不同的酶都是不一样的。如果酶的延伸速度是一分钟1kb,那么你就设3.5分钟,如果是半分钟1kb,就设2分钟,就这样。退火温度是看你设计的引物,你把引物放到设计软件上看一看,调整一下buffer的离子浓度,看看退火温度是多少。就可以了。
④延伸时间要足够长,一般按1min/kb延伸。
PCR 中如果每次延伸时间过长, 中如果每次延伸时间过长, 【求助】 求助】 岂不是会出现两条条带? 岂不是会出现两条条带? lingerswjs 2007-02-15 19:28 消息 ...
Taq DNA聚合酶保存不当而失活是PCR实验失败 的常见原因。 温度循环参数 ? ? ? ? 变性温度与时间 复性温度与时间 延伸温度与时间 循环数: PCR实验中常见问题...
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导致PCR失败的最主 失败的最主 要原因 一般93℃~94℃lmin足以使模板 足以使模板DNA变性 一般 ℃℃ 足以使模板 变性若低于93℃ 若低于 ℃则需延长时间 但...
(二)变性--退火--延伸循环: ①模板 DNA 的变性:模板 DNA 经加热至 93℃左右一定时间后,使模板 DNA 双链或经 PCR 扩 增形成的双链 DNA 解离,使之成为...
PCR 由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板 DNA 的变性:模板 DNA 经加热至 93℃左右一定时间后,使模板 DNA 双链或经 PCR 扩增形成的双链 DNA ...
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反应条件为温度、时间和循环次数。 温度与时间的设置: 原理三步骤而设置变性-退火 退火-延伸 温度与时间的设置: 基于 PCR 原理三步骤而设置变性 退火 延伸 三个...
通常在最后一轮要适当的将延伸时间延长至 4-10min,这样做是使 pcr 反应完全以提 高扩增产量。 3.继续 72 度延伸了 10 分钟除了可以使 pcr 反应完全以提高...
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