动物肝组织中丙二醛含量测定方法的改进

目的初步探讨糖类物质对肝组织中丙二醛(MDA)含量测定的干扰并改进测定方法。方法该实验以含糖量不同的小鼠肝匀浆作为实验材料,通过葡萄糖在450nm和532nm处吸光度值的正相关关系建立直线回归方程,校正MDA在532nm处的吸光度值。计算出样品中MDA含量。结果肝组织中糖类物质会干扰MDA含量的测定,尤其是当样品中糖量含量间差异较大时,糖的干扰可能导致对机体受损程度的错误评判

时珍国医国药 2 1第 2卷第 1 0 0年 1期

LS IH NM DCN N A E I E IAR S A C 00V L2 O 1 I Z E E IIEA DM T RAM DC E E R H21 O .1 . H N

动物肝组织中丙二醛含量测定方法的改进 周琪，梁运祥 407 ) 3 0 0 (中农业大学农业微生物国家重点实验室，华湖北武汉

摘要：目的初步探讨糖类物质对肝组织中丙二醛( D ) M A含量测定的干扰并改进测定方法。方法该实验以含糖量不同 的小鼠肝匀浆作为实验材料，通过葡萄糖在 4 0 m和 5 2m处吸光度值的正相关关系建立直线回归方程，正 M A在 5n 3n校 D 52 m处的吸光度值。计算出样品中 M A含量。结果肝组织中糖类物质会干扰 MD 3n D A含量的测定，尤其是当样品中糖量含量间差异较大时，的干扰可能导致对机体受损程度的错误评判。结论改进后的方法更为科学、确，应用于动糖准可 物肝组织丙二醛含量的测定

关键词：丙二醛；灵芝多糖；葡萄糖；直线回归法

中图分类号：2 4 1 R8.

文献标识码： B

文章编号：0 80 0 ( 0 0 0 -2 4 2 10 -8 5 2 1 ) 1 2 - 0 0

丙二醛 ( l id hd, A) Ma md leve MD是机体内的氧自由基攻击色粉末为灵芝粗多糖。 o a生物膜中的多不饱和脂肪酸，成的脂质过氧化物，试 MD 2 3肝匀浆的制备动物禁食过夜，日颈椎脱臼处死、形测 A .次开胸、剖的量可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的开腹腔。用 4℃生理盐水清洗肝脏，用滤纸吸干肝表面水分，称程度。传统的测定方法是利用过氧化降解产物中的丙二醛与肝重， 2倍干重的0 0 o/ B缓冲液在匀浆机内匀浆，加 0 .5m LLP S即硫代巴比妥酸 ( B在高温和酸性条件下缩合， T A)形成的红色产物制成 5%肝匀浆。所有操作均在冰浴中进行。 三甲川 (,,三甲基恶唑 24一酮 ) 52 m处有最大吸收 24小鼠肝组织糖类物质含量的测定小鼠肝组织糖类物质含 3 55一，二于 3n .峰来进行测定的。这种方式常常受到多种物质不同程度的干量利用苯酚硫酸法进行测定。 扰。其中最主要的

干扰因素是组织内的可溶性糖。动物肝组 2 5葡萄糖对 T A反应的影响测定 . B织中含有大量的肝糖原，测定时降解的葡萄糖会干扰测定。而 2 5 1葡萄糖与 T A反应的比色测定因为肝组织存在较多的在 .. B探讨动物组织中糖类物质对 MD A测定的干扰及消除方法还未糖原，其在一定条件下可降解为葡萄糖，以本实验以葡萄糖为所见报道。本研究以含糖量不同的小鼠肝匀浆作为实验材料，初步标准探讨排除糖类物质对 MD A—T A反应于扰的情况。参照 B探讨了葡萄糖对肝组织中 M A含量的测定的干扰并改进了测 MD D A测定试剂盒的测定方法， 20 l 0mgm葡萄糖溶液，取 0 / l 5 定方法。 加入 0 6 B 5%冰醋酸溶解配制 ) . l沸水浴 8 i .%T A(0 3 2m, 0 rn后 a 1材料 40 0rm n心 1 n取上清液经 72型紫外光栅分光光度计 0 i离/ 0mi, 5 I 1动物清洁级昆明种雄性小鼠，8~2, . l 0g由湖北省疾病预 40~ 0 E扫描并记录结果。 0 70H 防控制中心实验动物研究中心提供。动物饲养室温度为 2 2~2 2 52 5 . . MD A测定条件对样品中肝糖原降解情况的影响取 0 5 .℃,度为 6%一8%。湿 5 0 m%肝匀浆上清液， l 5加入 15ml 0冰醋酸后沸水浴 2 . % 5 0~8 0 12试剂丙二醛 ( A) . MD测定试剂盒，于南京建成工程研究 r n并设置对照组： 0 5m%肝匀浆上清液，入 15m蒸购 a, i取 . l 5加 . l所。其它化学试剂均为分析醇。 馏水。将各组反应液 p H调至 7 0后， .加入 2 m N l S溶液煮沸 D 13仪器 72型紫外光栅分光光度计 ( . 5上海精密科学仪器有限 5 i后测定各样品在 5 0n mt t 4 m处吸收值的变化。 公司 )飞鸽牌 T L一1C离心机 (海安亭科学仪器厂 )解剖 25 3; G 6上； .. MD A—T A反应中糖类物质干扰的排除(线回归法 ) B直 剪。 取不同浓度 ( 5 g m )葡萄糖溶液，照丙二醛 ( A) 0— 0m/ 1的按 MD测 2方法定试剂盒上的说明，入 0 6 T A(0冰醋酸溶解配制 ) .加 .% B 5% 32

2 1动物分组及给药清洁级昆明雄性小鼠 4 . 8只，体质量 l m,沸水于中 8 i 40 0rmn离心 5 i,定上清液 8~ l置 Omn后 0/ i m n后测

2。参照文献[] 0g 3的方法，实验动物按体重随机等数分为 4在 40n将 5 m和 5 2n下的吸光度值，析其中的相关关系 J 3 m分。 组，即对照组 ( ot lgop C、 cnr ru, G)多糖高剂量组 ( ih—ds 26两种方法测定小鼠肝组织 M A含量的比较方法 1步骤 o hg oe . D: g u, )多糖中剂量组 ( ei—ds ru, r p HG、 o m da oegop MG)多糖低剂同试剂盒说明书所述一致，组小鼠肝匀浆样品显色后测定 l、各 量组 (o 1 w—ds r p L,组 1。对照组 0 3m/ oeg u,G)每 o 2只 . ld生理盐 40 m、 2 m波长下的吸光度值 O 、 D根据直线回归方 5n 5 n 3 D, O 。水灌胃，其余 3组以 0 3m/ ./d不同浓度的灵芝多糖溶液灌胃，多程求出各样品中糖分在 52 m处的吸光度值 3n D,与：,:之糖高、、剂量的服用量分别为 20 10 5 g ( g )实差即是 MD T A反应产物在 52n中低 0,0,0m/ k d。 A— B 3 m下的吸光度值，用该值进 一

验期间小鼠自由摄食及饮水， 5天称量 1每次体重，根据体重调步计算得到样品中 MD A含量。 整灌胃量，连续灌胃3。 0d方法 2以试剂盒上提供的传统方法测定 MD: A含量。 2 2灵芝多糖的制备实验室固体发酵所得灵芝菌丝体 10 g 3结果与分析 . 0 加人 7L蒸馏水，5℃水提 5 n 8 0mi。过滤所得的上清用旋转蒸发 31小鼠肝组织中糖类物质的含量经过多糖灌胃的小鼠， .其肝仪浓缩到 0 1L后， .加入 0 1L无水乙醇 4℃过夜沉淀， 0/ . 40 0r组织中糖类物质的含量均比对照组小鼠高。C G组、 G组、 H MG mn离心 2 i后取沉淀用适量蒸馏水溶解， i 0r n a冷冻干燥得到的褐 组、 G组小鼠肝组织中糖类物质的含量分别为 (6 4 L 3 . 5±67 ) .0, (7 0 4 .5±95 ) (0 1 2 3 ) (8 6 9 4 )m/。/鼠肝 . 7,4 .5± .4, 3 .4± .

1 gg J、组织糖含量在对照组与试验组之间存在着较大差异。

收稿日期：090 -6修订日期：0 90 -3 20 - 2; 4 2 0 -62基金项目：江省重大科技攻关项目资助 ( o2 0 C 2 1 )浙 N .0 4 10 0

3 2葡萄糖对 T A反应的影响测定 . B

作者简介：周

琪 ( 95 )女 ( 18一，汉族 )湖北武汉人，为华中农业大学生 3 2 1葡萄糖与 T A反应的比色测定葡萄糖与 T A反应产物，现 . . B B

命科学技术学院在读硕士研究生，主要从事微生物产品及发酵工艺工作.的吸收光谱如图一所示， 反应产物在 40~60 n 0 0 m处均有吸收通讯作者简介：梁运祥( 9 1)男( 16一，汉族)湖北仙桃人，,现任华中农业值，中在 4 0n其 5 m处有峰值吸收。而赵世杰等的研究表明， 大学生命科学技术学院教授，博士研究生导师，主要从事基础微生物应用 MD A与 T A显色反应产物在 4 0 n处无吸收。因此可以在 B 5 m 研究工作 .

4 0l 5 m测定吸光度值计算葡萄糖的含量，而消除葡萄糖对 l从

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