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色谱分析总复习

一、名词解释

1 capacity fact:容量因子,也称分配容量或容量比,用k′表示。其定义为:一定温度与压力

下两相达平衡后,溶质在固定相和流动相中分配量(质量或摩尔数)之比.

2 分配系数:K,一定温度与压力下两相达平衡后,组分在固定相和流动相中浓度的比值;

3 extra-column effect:柱外效应,即除柱内多种因素产生的色谱峰扩张外,其它产生峰扩张的

因素之和:进样系统,系统连接管,检测器及其它柱外因素引起的峰扩张。

4 gradient elution:梯度洗脱,在HPLC分析中,控制流动相组成或洗脱强度随时间的改变而

改变,以使极性差异较大的多个组分均能分离,同时谱峰间隔较均匀,分析时间尽量短。

5 HPSEC:高效体积排阻色谱法,即以多孔性填料为固定相,依据样品组分分子体积大小的差

别进行分离的液相色谱方法。常用于肽和蛋白质的分子量分布测定及多步分离纯化程序中。其

填料一般有硅胶基质和合成高聚物基质以及高交联多糖型凝胶三种。

6 ODS:十八烷基键合硅胶,又称C18. 典型的反相色谱柱,表面键和的基团为非极性羟基,

适于分离弱极性,中等极性,较强极性及可电离的酸碱性有机物。

7 基线:在正常操作条件下,仅有流动相通过检测器系统时所产生的连续的响应信号,一般

是一条直线;

8 峰面积:色谱曲线与基线间所包围的面积;

9 半峰宽:亦称半宽度,半峰宽度,指色谱峰高一半处的宽度

10 标准偏差σ:正态分布曲线x=±1时(拐点)的峰宽之半。正常峰宽的拐点在峰高的0.607

倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小,分散程度小、峰形瘦、

柱效高;反之,σ大,峰形胖、柱效低。

11 死时间t0:流动相流过色谱柱所需时间(不保留组分流过色谱柱所需时间)

12 调整保留时间:tR’=tR-t0,指扣除死时间后的保留时间。

13 保留时间tR—进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。

14 相对保留值:(用γ或α表示,也称分离因子)两个组分调整保留值之比=tR2’/tR1’=VR2’/

VR2’;

15 分离度: 相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值,也叫分辨率,表示相邻两峰的分离程

度。

16 色谱柱效:每米柱长具有的理论塔板数定义为色谱柱效,它是衡量色谱柱分离效能高低的

一种量度。

1.在进行HPLC分析时,为防止分析柱污染,应采取哪些措施?

1).加一个保护柱(预柱),其固定相性质应与分离柱一样或相近。

2).样品要尽量净化,如沉淀蛋白,去除色素和无机盐等。

3). 样品分析结束后,应及时用适当溶剂清洗色谱柱.

2.乙醇的沸点为78.3℃,丁酮的沸点为79.6℃,在气相色谱柱上是否一定是乙醇先出峰,丁酮后

出峰,为什么?

不一定.因为保留值除与样品组分的沸点有关外,还与样品及固定相的极性有关。乙醇(bp 78℃)

和丁酮(bp 80℃)二个组分在非极性柱上,因为组分出峰的顺序由蒸汽压决定,沸点高的保留

时间长,所以乙醇先出峰,丁酮后出峰;在极性柱上,沸点和分子之间作用力同时作用,在强

极性柱上分子间的作用力其主要作用,按极性大小出峰,乙醇的极性比丁酮大,所以丁酮先出

峰,乙醇后出峰。

4.电喷雾离子化的原理是什么?离子化过程分哪三步?

原理:在喷针针头与施加电压的电极之间形成强电场,该电场使液滴带电,带电的溶液在电场

的作用下向带相反电荷的电极运动,并形成带电的液滴。由于小液滴的分散比表面积增大,在

电场中迅速蒸发,结果是带点液滴表面单位面积的场强极高,从而产生液滴的“爆裂”。重复此

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